顾名思义,非标定量就是不需要对样品进行同位素标记,即可对蛋白进行鉴定和定量的质谱技术。
Label-free技术操作简单,对样品需求量低,不需要价格昂贵的同位素标记物,可以做任意样本的总蛋白质差异定量,这些特点使得label-free技术适用于大样本量的定量比较。Label-free技术通过直接对比样品在特定肽段的一级质谱信号强度进行相对定量,因而对实验的稳定性和重复性要求较高,准确性也比标记定量差,高度依赖质谱的稳定性。
A. Label-free技术中,利用多肽在MS1中的信号强度(Area under curve)进行定量,二级谱图用来确定多肽组成,健康组和疾病组的一级信号强度直接用于定量;B. iTRAQ标记定量中,定量多肽混合后进行LC-MS/MS鉴定分析,利用报告基团的质量差异,对比二级图谱中报告基团的信号强度进行相对定量