高通量蛋白质组学分析
数据非依赖性采集(DIA)蛋白组学
详情介绍

在数据非依赖性采集(DIA)模式下,将整个质谱扫描质量范围分为若干个窗口,在一个扫描循环内依次对每个窗口的所有母离子进行碎裂,并采集记录全部的子离子信息。DIA技术不需要指定目标肽段,扫描点数均匀,利用谱图库可以实现定性确认和定量离子筛选,同时可以实现数据回溯。



DIA vs DDA:

无歧视地获得所有肽段的信息,不会造成低丰度蛋白信息的丢失;

循环时间固定,扫描点数均匀,定量准确度高;

肽段的选择没有随机性,数据可以回溯,对于复杂蛋白样本,特别是低丰度蛋白具有更优异的重现性

DIA vs SRM:

无需提前指定目标 肽段,适用于未知蛋白分析;

无需优化方法,获得数据后再基于谱图库实现定性确证和定量离子筛选;

通量无上限,适合大 规模蛋白定量分析



DDA与DIA模式下,质谱数据采集过程对比:

A. 在MS1扫描过后,DDA围绕选中离子的质量范围选择一个极窄的质量窗口,对该窗口内的离子进行MS/MS扫描;

B. 在DIA中,500-900的质量范围被均匀细分成20个小窗口,MS/MS扫描没有限制在某个多肽,而是在扫描循环内依次对每个窗口的所有母离子进行碎裂,并采集记录全部的子离子信息;

C. DDA所得的二级图谱,所选母离子的碎裂信息在一张二级图谱中完全展示;

D. DIA每张二级图谱记录着多个多肽的子离子信息(例如这里的N, M, O, P),且单个多肽的信息分布在不同二级谱图中,但是这些信息可以分别被提取出来,且具有极佳的重现性


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